NanoLuc^®ベクター

28種類の異なるベクターから、実験目的に適したNanoLuc^® ルシフェラーゼを選択できます。

ベクターの特長

• Nluc遺伝子のコドンは最適化され、ほとんどの転写因子結合サイト、プロモーターモジュール、スプライスサイトならびにその他の調節配列を除去
• pGL4ベースの構造により既存のプラスミドからの移し変えが容易
• 研究対象となる遺伝子ORFとNanoLuc^® が融合したクローンコレクションも有り

ベクターの種類

• レポーターアッセイ用、NanoLuc^® との融合タンパク質作製用、シグナル伝達解析用
• 標準型、不安定型、分泌型
• プロモーターの有無（クローニングベクターかコントロールベクターか）
• 安定細胞株作製用のハイグロマイシンマーカーやネオマイシンマーカーの有無
• 第2のレポーター遺伝子（ホタルルシフェラーゼ：Fluc）の有無（あればスクリーニング時の偽陽性排除に役立つ）

cAMP応答配列 (CRE)制御下のルシフェラーゼを含むコンストラクトをHEK293細胞にトランスフェクションした。フォルスコリンで誘導した後、Nano-Glo^® およびONE-Glo^® Luciferase Assay Systemsの各試薬とGloMax^® 96 Microplate Luminometerを用いてルシフェラーゼ発現を検出した。NanoLuc^® ルシフェラーゼは標準型または不安定型ホタルルシフェラーゼよりも明るい発光シグナルを示した。PEST不安定化ドメインはどちらのルシフェラーゼにおいても誘導倍率を向上させ、NanoLuc^® を使用した際に最大の応答性が得られた。すべてのケースで誘導によるEC50値はほぼ同様。

	NLuc	FLuc	Nluc-P	Fluc-P
Luminescence (RLV)	1.7E6	6.8E4	8.6E4	6.0E3
EC50 (μM)	6	6	10	6
Induction Ratio	230	270	1700	780

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NanoLuc^® ルシフェラーゼ (secNluc)のCRE応答性発現を6時間フォルスコリン誘導あるいはDMSOコントロールの細胞で測定した。培地交換をt=0で行った。分泌アッセイフォーマットによりレポーターの活性化キネティクスを細胞溶解することなく測定できた。シグナルはGloMax^® 96 Microplate Luminometerを用いて測定した。