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RT-PCR　基本情報

RT-PCRでpoly (A)+ RNAの代わりにTotal RNAを使えますか

cDNAライブラリーの作成を目的としていなければ、RT-PCRの鋳型にpoly(A)+ RNAは必要ありません。1μgのTotal RNAをサンプルとして十分な結果が得られます。poly(A)+ RNAでは、増幅されたmRNAの量により、通常1pgから1μgで十分です。

Total RNAのサンプルでは、高濃度のリボゾーマルRNAとトランスファーRNAが存在するため、ランダムプライマーを用いてcDNAライブラリーを作成することは一般的には推奨しません。しかし、PCRは高感度な増幅が可能なため、ランダムプライマー・oligo(dT) プライマー、目的の遺伝子に特異的なプライマーを用いて、第1鎖cDNAを合成することができます。そのため、プロメガではReverse Transcription System(Cat.# A3500)にランダムプライマーを加えました。（PN71-Q&A)