PCR基本情報

どの耐熱性DNA polymeraseが非鋳型依存的に3’末端にAを付加しますか。

3´→5´ exonuclease活性を欠いた耐熱性DNA Polymeraseは鋳型に依存せずにヌクレオチド(通常はdATP)を増幅産物の3’末端に付加します。このような酵素には、Taq DNA Polymerase、Tfl DNA Polymerase、Tth DNA Polymeraseが含まれます (表 1)。polymeraseが3´→5´ exonuclease proofreading活性を持つ場合、 この活性によって鋳型に依存しないヌクレオチドは除かれ、平滑末端を有する産物となります。これらの酵素にはTli DNA Polymerase、Pfu DNA Polymeraseなどが含まれます。(PN71-Q&A)

表1.耐熱性DNAポリメラーゼの特徴

特徴Taq DNA PolymeraseTfl DNA PolymeraseTth DNA PolymeraseTli DNA PolymerasePfu DNA Polymerase
由来Thermus AquaticusThermus flavisThermus thermophilus HB-8Thermococcus litoralisPyrococcus furiosus
分子量94kDa94kDa94kDa90kDa92kDa
半減期(95℃)40分40分20分400分
伸長率(nt/sec. @72℃)60~150※※2567
逆転写活性低レベル低レベル
(Mn2+依存性)
×
サイクル半減期50サイクル50サイクル25サイクル500サイクル
3'Aの付加××
5'→3' エクソヌクレアーゼ活性××
3→'5' エクソヌクレアーゼ活性×××
※データー無  ※※解析中

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