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P450-Glo™ Assay System

キット以外に用意する試薬などはありますか？

P450-Glo™ Assay Systemを使用して酵素アッセイを行う場合、以下の試薬が必要になります。
製品マニュアル、16ページの「お客様が別途ご用意いただくもの」に記載があります。

• 1M KPO₄ (pH7.4)　（組成は、マニュアル47ページにあります）
• 滅菌水または脱イオン水
• CYP450活性のある試薬（精製酵素など）、CYP450還元酵素を含むもの
  CYP2C8、2C9、3A4、3A5、3A7のアッセイを行う場合は、CYP450還元酵素に加えてcytochrome b5活性も含むものを推奨します。
  CYP450精製酵素はコーニングインターナショナル株式会社（旧BD Gentest社製）、日本農産株式会社（Cypex社製）など複数の会社で販売されています。マニュアル47ページに詳細な情報があります。
• CYP450活性を欠損する試薬
  minus-P450 control reactionに使用します。例えば、CYP450活性のある試薬としてCYP450リコンビナント酵素を使う場合は、CYP450を発現させていないcontrol membraneなどをお使い下さい。
• NADPH Regenerating System：
  Promega, NADPH Regeneration System (Cat# V9510)
  　V9510の構成品
  　NADPH Regeneration System Solution A, 2.75mL
  　NADPH Regeneration System Solution B, 0.60mL
  　それぞれの試薬の組成はマニュアル47ページに記載されています。
  Promega 以外では、以下のメーカーから販売されています。
  1) コーニングインターナショナル株式会社（旧BD Gentest社製）
  　NADPH Regeneration System Solution A (Cat#451220, 5mL)
  　NADPH Regeneration System Solution B (Cat#451200, 1mL)
  2) Sigma （下記の試薬を使用して調製してください。）
  　G-6-P-dehydrogenase from baker's yeast (Cat# G6378, 100units)
  　G-6-P disodium salt hydrate (Cat# G7250, 500mg)
  　NADP sodium salt (Cat# N0505, 100mg)
• アセトニトリル（CYP2D6、2C19アッセイのみ）
• 100mM Tris-HCl, pH7.5（Luciferin-PPXEを用いたCYP3A4アッセイのみ）

<参考>
P450-Glo™ CYP450 Screening System (CYP1A2 Cat#V9770, CYP2B6 Cat#V9781, CYP2C9 Cat#V9790, CYP3A4 Cat# V9800、V9910およびV9920, CYP2C19 Cat# V9880, CYP2D6 Cat# V9890, 各1,000回分)については、上記の試薬が全て含まれています。付属のCYP450精製酵素は、昆虫細胞で発現させたヒトCYP450の組換え体です。また、コントロールメンブレン（5mg/mL, 100μL）も付属品として添付しています。こちらは、CYP450精製酵素のネガティブコントロールとして、CYP450精製酵素の代わりに、テストサンプルで使用するCYP450精製酵素と等量を使用してください。

P450-Glo™ CYP450 Screening System　製品マニュアル

D-Luciferin Standard Curveを作成する場合は、D-Luciferin（Beetle Luciferin, Potassium Salt, Cat# E1601など）が使用できます。