• Q&Aトップ
• 細胞生存・毒性
• 細胞毒性試験_エンドポイントアッセイ
• CytoTox 96® (発色検出)

CytoTox 96® (発色検出)

CytoTox 96® の使用方法を教えてください。

CytoTox 96^®は、細胞を介した細胞毒性試験、化学物質などの薬剤を介した細胞毒性試験、総細胞数の測定に使用することができます。

細胞を介した細胞毒性試験は、ターゲット細胞に対するエフェクター細胞の傷害作用を細胞毒性として測定します。まず、ターゲット細胞数の最適化を行い、以下のようなコントロールを設定して、アッセイを行います。
（1） エフェクター細胞の自然放出LDH量　（2） 実験区（ターゲット細胞に対するエフェクター細胞の傷害作用）　（3） ターゲット細胞の自然放出LDH量　（4） ターゲット細胞からの最大LDH放出量　（5） Lysis Solutionの添加による液量補正用コントロール　（6） 培養液のみのバックグラウンド（ブランク）

（1）、（2）、（3）、で得られたそれぞれの吸光値の平均値から （6） のブランクの平均値を差し引きます。（4） で得られた吸光値の平均値から（5） の液量補正用コントロールの吸光値の平均値を差し引きます。以下の計算式にしたがって細胞毒性のパーセントを算出します。

細胞毒性 (%) =

（実験区－エフェクター自然放出量－ターゲット自然放出量）／（ターゲット最大放出量－ターゲット自然放出量）

× 100

化学物質などの薬剤を介した細胞毒性試験は、薬剤による傷害作用を細胞毒性として測定します。使用する細胞数の最適化を行い、以下のようなコントロールを考慮してアッセイを行います。
（1） 細胞から自然に放出されるLDH量　（2） 試験する化合物やその中間伝達物質の影響　（3） 細胞からの最大LDH放出量

培地のみから成るバックグラウンドコントロールは"ブランク"として使用します。細胞毒性試薬(X軸：対数目盛)に対するLDHの放出量(Y軸：490nmにおける吸光度)をプロットし、IC₅₀値(50%の阻害が起きる濃度)を評価します。

総細胞数の測定は、あらかじめ細胞の希釈液列にLysis Solution (10X)を添加し、CytoTox 96^®の試薬を添加して得られる吸光値を測定することで、細胞数と吸光値の相関関係を求めます。細胞数とLDH活性として示される吸光値は比例しますので、サンプル中の細胞数を見積もることができます。

詳しい使用方法は製品プロトコール（TB163）をご参照ください。