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Kinase-Glo®

Kinase-Glo® で測定できるキナーゼにはどのようなものがありますか？

Kinase-Glo^® はキナーゼ反応後の反応溶液中のATP量を測定しますので、どのタイプのキナーゼにも使用できます。弊社で実施したキナーゼの反応条件を表1に示します。

表1　キナーゼの反応条件

Kinase	Substrate	ATP	Reaction Buffer	Kinase Rxn Time/Temp.	EC50
PKA (V5161)	Kemptide (V5601) 5μM	1μM	40mM Tris [pH 7.5], 20mM MgCl2, 0.1mg/mL BSA	20min., room temp.	0.15 units/well
PKC (V5261)	Neurogranin (28-43) (V5611) 10μM	1μM	20mM Tris [pH 7.5], 10mM MgCl2, 0.1mg/mL BSA, 250uM EGTA, 400uM CaCl2, 0.32mg/mL phosphatidylserine, 0.032mg/mL diacylglycerol	90min., room temp.	7.9ng/well
Lck (Upstate, #14-442)	PTK peptide 2 substrate (V288A) 250μM	3μM	8mM imidazole hydrochloride [pH 7.3], 8mM beta-glycerophosphate, 200uM EGTA, 20mM MgCl2, 1mM MnCl2, 0.1mg/mL BSA	60min., room temp.	4.3 m　units/well
Erk-2	66μM MBP (bovine myelin basic protein, Upstate, #13-104)	100nM	40mM Tris-HCl [pH 7.5], 0.1 mg/mL BSA, 20mM MgCl2	120min., room temp.	49ng/well
PI 3-kinase (pp110Y)	0.5mg/ml L-α-phosphatidylinositol (Sigma # P8443)	500nM	10mM Tris-HCl [pH 7.5], 50mM NaCl, 5mM MgCl2	90min., room temp.	70ng/well