P450-Glo™ Assay System

P450-Glo™ Assayとはどのような製品ですか?

P450-Glo™ Assayは、シトクロムP450(以下CYP450と略します)に対する阻害剤や相互作用する化合物をスクリーニングする目的で開発された製品です。
CYP450精製酵素と任意の化合物を用意し、Luciferin誘導体であるP450-Glo™ Luciferin Substrate (表1参照)と反応を行います(Step1)。ここで反応が起こると、 P450-Glo™ Luciferin Substrateは代謝されてルシフェラーゼの基質であるLuciferinになります。

次に、Luciferin Detection Reagent(システム付属品)を加えて、ルシフェラーゼ反応を行い、ルミノメーターでその発光量(RLU値)を測定します(Step2)注)。

Step1, 2の概略図はこちら

CYP450の活性が高いと、RLU値は高くなります。逆にCYP450の活性が低いと、RLU値は低くなります。

以下にP450-Glo™ Luciferin Substrateとそれに対応するCYP450の分子種の表を示します。

表1 P450-Glo™ Assayで使用するP450-Glo™ Luciferin Substrateと
それに対応するCYP450分子種

P450-Glo™ Luciferin SubstrateCYP450分子種※1アッセイタイプ
Luciferin-ME1A2, 2C8, 2C9, 2J2, 4A11, 4F3B, 19酵素
Luciferin-1A2※31A2酵素、生細胞※2
Luciferin-CEE1A1, 1B1, 3A7酵素、生細胞※2
Luciferin-2B6※32B6酵素、生細胞※2
Luciferin-H2C9酵素、生細胞※2
Luciferin-ME EGE2D6, 1A1, 1A2, 2B6※5酵素
Luciferin-H EGE2C19, 1A1, 1A2酵素
Luciferin-BE※43A4, 3A5, 3A7, 4F12酵素
Luciferin-PFBE※43A4, 3A5, 3A7酵素、生細胞※2
Luciferin-PPXE※43A4, 3A5, 3A7酵素
Luciferin-IPA※43A4酵素、生細胞※2

注)測定は、ルミノメーター(発光測定装置)を使用します。
※1 太字名のキット群に、該当Luciferin基質が含まれている製品があります。
※2 生細胞でのアッセイについてはこちらをご参照ください。
※3 CYP1A2/Luciferin-1A2およびCYP2B6/Luciferin-2B6の代謝産物はルシフェリン前駆体です。Luciferin Detection Reagent中のD-Cysteineとの反応によりD-luciferinが生成します。
※4 Luciferin-BE、Luciferin-PFBE、Luciferin-PPXE、Luciferin-IPAの使い分けに関しては、こちらをご参照ください。
※5 反応系にcytochrome b5がある場合、CYP2B6活性は検出できません。

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