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Single Step (KRX) Competent Cells

KRXのトランスフォーメーション操作を簡単に教えてください

次のような手順で行います。

用意するもの

• LB あるいは SOC 培地
• LB プレート（適切な抗生物質を含むもの）
• IPTG (カタログ番号 V3955)
• X-Gal (カタログ番号V3941)

1. KRXを-70℃から取り出し、氷上で融解する。
2. DNA(1～50ng)を添加し、軽く混合する。（ボルテックスは行わないこと。）
   注意：　50µlのコンピテントセルには、5µl、100µlのコンピテントセルには、10µlの容量を超えないようにDNA溶液を添加する。
3. 直ちに氷上で冷却する。（5～30分間）
4. ヒートショックを行う。（42℃で15-20秒間）　（混合はしないこと。）
5. 直ちに氷上で冷却する。（2分間）
6. 室温のSOC培地を添加し、37℃で振とう（225rpm）しながら60分間インキュベーションを行う。
   注意：　50µlのコンピテントセルには、450µl、100µlのコンピテントセルには、900µlのSOC培地を添加する。
7. プレートに100µlを塗布する。（原液から100倍希釈までのいくつかの濃度条件で行う）37°C で一晩培養する。

詳しくは製品プロトコール（TB352）をご参照ください。